尊龙凯时提供的人骨肉瘤细胞MG63培养指南如下，以帮助研究人员在细胞培养过程中获得最佳结果。

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P
传代方法：第一次建议1:2传代。换液情况：每2天更换培养基。
备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理步骤

在收到细胞后，将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是确保运输细胞活力的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个培养瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（最好保留40x, 100x和200x的各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据，如未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培育步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml继续培养；若细胞密度超过80%，则进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆脱落，则迅速轻敲培养瓶加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

在细胞生长至培养瓶80%覆盖时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。弃上清后沉淀细胞，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护设备），迅速放入37℃水浴解冻，直到冻存管内无结晶。随后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。弃上清，加入5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。若脱离过多，可将培养液收集、离心后，收集上清用于过渡培养。随后添加胰酶消化，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入完全培养基终止反应。再离心、弃上清后，重悬并按比例进行分瓶传代，补充完全培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中。

五、售后条款

如细胞在实验过程中出现问题，可能的重发情况包括：运输过程中出现的细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等；收到后48小时内出现污染问题并提供实验结果；常温运输的细胞在静置24小时后及干冰运输的细胞复苏24小时后，若细胞存活率低（需提供真实清晰的细胞状态照片）；若细胞在复苏24小时后或静置4小时未开封后出现污染；细胞活性问题需在7天内反馈，用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后予以重发。

不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、错误操作导致细胞状态不佳、使用非推荐培养体系致的细胞不良状态、未提供细胞前三天照片的情况、经其他处理的细胞以及在收到后两天内未反馈问题等。

在此，尊龙凯时期待翻开您科研的新篇章!